Odpowiedź:
Aby zachować je w nienaruszonym stanie …
Wyjaśnienie:
Enzymy restrykcyjne są używane w BARDZO małych ilościach, ale zazwyczaj są kupowane w nieco większych partiach.
Jeśli nic innego, zazwyczaj wolisz wykonywać różne testy z tą samą partią. Zakupiona partia musi zatem być przechowywana przez dłuższy czas.
Większość enzymów przez pewien czas jest doskonale zadowolona ze swojego buforu o temperaturze 4 stopni Celsjusza, ale ostatecznie ulegnie degradacji. 24 godziny to zazwyczaj akceptowany limit.
W celu dłuższego przechowywania partia musi zostać zamrożona. -20C to standard i utrzyma go przez kilka miesięcy. Na jeszcze dłuższe okresy (np. Jeden lub więcej lat) -70 ° C jest normą.
Konieczne jest szybkie zamrożenie, aw małych pojemnikach (np. Eppendorf), aby uniknąć zbyt częstego rozmrażania / ponownego zamrażania.
Aby uniknąć uszkodzenia białka w tak niskich temperaturach, można / należy dodać stabilizatory, takie jak DTT (di-tio-Treitol), albumina surowicy i, co najważniejsze, glicerol (5-50%)
Co dziwne, przy -20 ° C konieczne jest użycie 50% glicerolu, podczas gdy przy -70 glicerolu nie jest tak naprawdę konieczne, choć dodanie go może pomóc ustabilizować białko ….
Dlaczego enzymy restrykcyjne są ważne dla pobierania odcisków palców DNA?
Enzymy restrykcyjne będą ciąć cząsteczkę DNA tylko przy specyficznym wzorze zasad. (jak na zdjęciu) Ponieważ wszystkie organizmy (z niezależnych zygot) posiadają unikalne DNA, enzymy restrykcyjne przecinają DNA w różnych pozycjach i na różnych częstotliwościach. Powoduje to różne liczby „kawałków” o różnych długościach / rozmiarach. Polimorfizmy długości fragmentów restrykcyjnych (RFLP) to analiza fragmentów wytworzonych z danego enzymu restrykcyjnego - fragmenty są częściowo naładowane i będą reagować na pola elektryczne. Enzym jest ważny, ponieważ wytwarzany „odcisk palca” zależy od kaw
Dlaczego enzymy restrykcyjne są ważne dla technologii rekombinacji DNA?
Enzym restrykcyjny jest głównym narzędziem rekombinowanego technologicznie dna - wszystkie enzymy restrykcyjne kontrolują cząsteczkę DNA w sekwencji specyficznej sekwencji rozpoznawania. po uzyskaniu określonej sekwencji rozpoznawania wiąże się z miejscem i tnie każdą z dwóch nici podwójnej helisy w określonych punktach przez hydrolizę wiązań fosfodiestrowych. ENZYMY OGRANICZENIA SĄ WYWOŁANE JAKO NOŻYCZKI MOLEKULARNE.
Dlaczego ważniejsze jest, aby enzymy restrykcyjne rozpoznawały sekwencje palindromiczne?
Endonukleaza restrykcyjna, mimo że jest endonukleazą, tj. Enzymem trawiącym kwas nukleinowy, nie niszczy losowo cząsteczki DNA. Enzymy przecinają się tylko w sekwencjach palindromicznych, tworząc mniejsze fragmenty DNA. Enzymy restrykcyjne stosuje się do cięcia kolistej cząsteczki DNA pochodzenia prokariotycznego. Ten typ endonukleazy często wytwarza lepkie końce, które pomagają w tworzeniu rekombinowanego DNA, tj. Obcy fragment DNA (zawierający pożądany gen) można wstawić do cięcia. Technologia rekombinacji DNA otworzyła nowy horyzont w naukach biologicznych.