Dlaczego używamy kontroli negatywnej w PCR?

Dlaczego używamy kontroli negatywnej w PCR?
Anonim

Odpowiedź:

Zobacz poniżej

Wyjaśnienie:

PCR działa na matrycy DNA. Powiedzmy, że testujesz na HIV (HIV jest wirusem RNA, ale kiedy trafia do komórki, zostaje przekształcony w DNA … więc w zainfekowanej komórce będzie DNA HIV). Użyte primery stworzą produkt (amplikon), który odpowiada części DNA HIV. Jeśli widzisz ten amplikon, masz obecną sekwencję HIV ….. ale jeśli nie masz kontroli negatywnej, możesz mieć zanieczyszczenie.

PCR jest niezwykle wrażliwa. Istnieje wiele rozwiązań stosowanych w PCR (woda, bufor, dNTP, enzym) … i wszystkie z nich mogą łatwo zostać skażone DNA z innych próbek, a nawet z amplikonu, który powstał w reakcji, którą zrobiłeś wczoraj. Jeśli więc masz próbkę DNA pacjenta X i sprawdzasz obecność wirusa HIV za pomocą PCR, startery PCR mogą wydzielić produkt z DNA HIV w próbce DNA pacjenta X (jeśli ta osoba ma HIV), lub może to spowodować zanieczyszczenie. Ale nie można powiedzieć, czy to z powodu zanieczyszczenia, czy z HIV w DNA pacjentów.

Więc prowadzisz kontrolę wody. Tube 1 umieszczasz wszystkie składniki reakcji, a dla DNA dodajesz tylko wodę. To jest kontrola negatywna. NIC nie powinien tu się wzmacniać. W probówce 2 wkładasz wszystkie składniki reakcji i DNA pacjenta X. Jeśli otrzymasz produkt tutaj (i nic w probówce 1), pacjent X prawdopodobnie ma DNA HIV w swoim DNA. Jeśli otrzymasz produkt zarówno w probówce 1, jak i tubie 2, masz problem z zanieczyszczeniem i nie możesz stwierdzić, czy wirus HIV w próbce pacjenta pochodzi z choroby, czy z zanieczyszczenia.

Więc zawsze prowadzisz kontrolę wody (woda zamiast DNA).