Dlaczego DNaza i lizozym w etapach lizy stosowanych podczas oczyszczania białka?

Dlaczego DNaza i lizozym w etapach lizy stosowanych podczas oczyszczania białka?
Anonim

Odpowiedź:

Aby oczyścić frakcję białka …

Wyjaśnienie:

Jeśli oczyszczasz (często specyficzne) białko, będziesz musiał pozbyć się jak największej ilości śmieci, które mogą być związane z nimi.

Zależy to w pewnym stopniu od tego, po jakim białku się znajdujesz, ale ogólnie jest to dobry pomysł, zwłaszcza w przygotowawczy oczyszczanie, aby pozbyć się jak największej liczby zanieczyszczeń.

1:

Ponieważ białka są generalnie duże i w konsekwencji pojawią się w niższych pasmach twojej (ultrawirowanej) frakcji, chcesz pozbyć się wszelkich kwasów nukleinowych, zwłaszcza jeśli białko, które rozpylasz, dotyczy takich jak Pol1, Odwrotna transkryptaza lub dowolny inny enzym zaangażowany w replikację / transkrypcję / translację.

Można oddzielić kwasy nukleinowe obecne w próbce za pomocą DNAzy: spowoduje to całkowitą hydrolizę DNA do jego części składowych.

Pamiętaj, że są różne DNAzy, różniące się mechanizmem i specyficznością dla ich substratu. W zależności od użytej DNAzy może to również pokazać Endo- lub Exo aktywność nukleazy …

Więcej na temat, RNAza jest bardziej odpowiedni, ponieważ RNA jest zwykle bardziej w zakresie wyporu / frakcji białek i może być związany z białkiem.

2:

Lizozym: Enzym o co najmniej dwóch funkcjach:

To deglikozyluje enzymy: Większość białek przenoszonych w krwiobiegu jest glikozylowana: mają do nich przyłączone kilka cząsteczek cukru. Lizozym usunie pozostałości cukru.

Ma także zdolność do rozbijania ściany komórkowej bakterii Gram-dodatnich, powodując je lizować. (jeśli chcesz oczyścić białko z bakterii Gram-dodatnich)

Wszelkie zdegradowane produkty, zarówno kwas nukleinowy, jak i szczątki cukru, pojawią się na górnych frakcjach probówki wirówkowej z powodu ich „lżejszej” wyporności ….