Dlaczego konieczne jest użycie tego samego enzymu restrykcyjnego do rozszczepienia (wycięcia) DNA obu organizmów użytych do stworzenia organizmu transgenicznego?

Dlaczego konieczne jest użycie tego samego enzymu restrykcyjnego do rozszczepienia (wycięcia) DNA obu organizmów użytych do stworzenia organizmu transgenicznego?
Anonim

Odpowiedź:

Zobacz poniżej …

Wyjaśnienie:

Enzymy restrykcyjne przecinają się w określonych sekwencjach, więc ten sam enzym restrykcyjny musi być użyty, ponieważ wytworzy fragmenty o tych samych komplementarnych lepkich końcach, umożliwiając tworzenie się między nimi wiązań.

Istnieją pewne zgodne miejsca restrykcyjne, które mogą być używane razem. Xho1 i Sal1 są przykładami. Ich lepkie końce pasują do siebie, więc można je podwiązać. Ale ligacja zabija zarówno stronę Xho1, jak i Sal1, więc nie można użyć żadnego z nich do ponownego przecięcia (w lokalizacjach ligacji).

Można również użyć egzonukleazy lub PCR, aby uzyskać najbardziej lepkie końce (5 lub 3 zwisy) na tępe miejsca - w ten sposób można połączyć się z tępym miejscem cięcia - ale to również zabije tępą stronę.