W teście ELISA, co robią przeciwciała pierwotne i przeciwciała wtórne?

W teście ELISA, co robią przeciwciała pierwotne i przeciwciała wtórne?
Anonim

Odpowiedź:

Zależy to od rodzaju testu ELISA.

Wyjaśnienie:

ELISA = Test immunosorbentu związany z enzymem.

Istnieją różne rodzaje testów ELISA. To, czego potrzebujesz:

  • przeciwciało z dołączonym do niego enzymem
  • antygen, z którym wiąże się przeciwciało
  • substrat enzymu, który powoduje mierzalną reakcję

The enzym do przeciwciała jest często HRP (peroksydaza chrzanowa). HRP może reagować z różnymi substratami, które zmieniają kolor lub emitują światło, oba mierzalne.

Obraz pokazuje przegląd różne rodzaje testów ELISA. Wyjaśnię, jak działają poniżej.

Bezpośredni test ELISA

Płytka jest pokryta antygenem (Ag) i a pierwszorzędowe przeciwciało z enzymem. Po dodaniu substratu zachodzi reakcja i jest proporcjonalna do ilości oddziaływań przeciwciało-antygen.

Pośredni test ELISA

Ponownie, płytka jest pokryta antygenem i a pierwszorzędowe przeciwciało wiąże się z antygenem. ZA drugie przeciwciało dodaje się, który wiąże się z pierwszym przeciwciałem. Drugie przeciwciało zawiera enzym, który reaguje z substratem.

Sandwich ELISA

Tutaj biorą udział dwa lub trzy przeciwciała. Przeciwciało wychwytujące jest przyłączone do płytek i wiąże się z antygenem. Następnie wykonuje się te same etapy, co metoda bezpośrednia (tylko jedno przeciwciało) lub pośrednia (dwa przeciwciała).

Konkurencyjny test ELISA

Czasami nazywany hamowaniem ELISA jest nieco bardziej skomplikowany. Płytka jest pokryta antygenem, który ma być badany. ZA pierwszorzędowe przeciwciało z enzymem najpierw inkubuje się z próbką o nieznanym stężeniu tego samego antygenu. Jest on następnie dodawany do płytki, umożliwiając przeciwciałom, które wciąż mają swobodę reakcji z antygenem na płytce. Po wypłukaniu kompleksów przeciwciało-antygen próbki dodaje się substrat.

Gdy nieznana próbka ma dużo antygenu, będzie mniej przeciwciał do wiązania się z płytką = niższy sygnał.