Czym jest chromatograficzna wymiana jonowa? + Przykład

Czym jest chromatograficzna wymiana jonowa? + Przykład
Anonim

Odpowiedź:

Jest to proces oddzielania różnych białek na podstawie ich ładunku i właściwości wiążących do materiału.

Wyjaśnienie:

Przy różnych wartościach pH różne białka przenoszą różne ładunki. Umieszczając mieszaninę białek w ustalonym pH, można uzyskać mieszaninę zawierającą białka o różnych właściwościach ładunku.

Jeśli ta mieszanina białek zostanie wylana na kolumnę, która zawiera materiał z ładunkiem, kolumna będzie wiązać białka w przeciwnych ładunkach.

Następnie można użyć różnych roztworów zawierających różne ilości jonów, aby wyeluować (odkleić) białka z kolumny.

Załóżmy na przykład, że masz mieszankę białek, z których chcesz oczyścić określone białko. Gdybyś wiedział, że przy określonym pH twoje białko będące przedmiotem zainteresowania było naładowane dodatnio, możesz wlać mieszaninę do kolumny zawierającej materiał naładowany ujemnie.

Wszystkie białka, które nie miały ładunku, lub gdy były naładowane ujemnie, płynęłyby prosto przez kolumnę. Możesz wtedy uwolnić swoje naładowane dodatnio białko, zalewając kolumnę jonami dodatnimi, które uzupełnią ładunek ujemny na kolumnie. Ta konkurencja spowodowałaby wymycie twojego białka.

Oto przykład takiego zdarzenia.

Każda taca zawiera bufor o innym stężeniu i jak widać w próbce 175 mM (górny lewy róg) bardzo mało czerwono-brązowego białka związało się z naładowaną błoną, ponieważ istnieje konkurencja między jonami w buforze i białko dla naładowanych miejsc wiązania na błonie (jony w buforze „wygrały”, ponieważ jest ich więcej, a więc zapobiegły wiązaniu białka). W próbce na dole po prawej stronie dużo białka związało się z błoną, ponieważ obecnych jest mniej jonów, aby konkurować o miejsca wiązania.

W tym filmie widać działającą chromatografię anionowymienną: