Odpowiedź:
Wiele…
Wyjaśnienie:
Istnieje wiele powodów, dla których pasma mogą nie pojawiać się na Western blot. Czy kombinacja próbek i przeciwciał działała w przeszłości?
Poniżej przedstawiam tylko kilka, które mogę wymyślić w chwili, w której zespoły mogą się nie pojawić:
-
Czy transfer białka z żelu? Spróbuj zabrudzić membranę czymś podobnym do ponceau S lub amidowej czerni, aby sprawdzić, czy pasma są obecne. Czasami można zobaczyć prążki białka na membranie, zwilżając je i trzymając pod kątem do światła.
-
Czy pierwotne przeciwciało działa? Jest to trudne do przetestowania i jedynym sposobem, w jaki możesz to zrobić, jest włączenie kontroli pozytywnej, gdy wiesz, że masz białko będące przedmiotem zainteresowania. Jeśli masz jakieś białko będące przedmiotem zainteresowania, możesz spróbować je zlokalizować na błonie Western blotting (tj. Nie uruchamiasz żelu) i sprawdzasz, czy otrzymasz wynik, jeśli przetworzysz błonę tak, jakby była to Western blot.
-
Czy wtórne przeciwciało rozpoznaje pierwszorzędowe przeciwciało? Znowu trudny do przetestowania. Jedynym testem, który możesz wykonać, jest test spot wspomniany powyżej w 2.
-
Czy „system wykrywania” działa? W zależności od stosowanej metody wykrywania, możesz spróbować wzbogacić się w drugie przeciwciało wtórne, aby sprawdzić, czy działa roztwór wykrywający, a także czynnik wyzwalający / enzym na drugorzędowym przeciwciele. Czy można wywołać reakcję tylko drugorzędowym przeciwciałem?
Wreszcie, może to być tak proste, jak jedno z rozwiązań zastosowanych podczas sondowania fabuły, która jest nieprawidłowo tworzona. Na przykład, jeśli stężenie soli w buforze jest nieprawidłowe, może to spowodować uwolnienie przeciwciał z plamki. To samo zdarzyłoby się, gdyby pH buforów było nieprawidłowe.
„Najdziwniejszą” przyczyną niedziałającego zachodniego plamki, którego osobiście doświadczyłem, była zmiana dostawcy mleka w proszku używanego do blokowania membrany. Proszek nowego dostawcy zawiera fosfatazę fosfotyrozynową, która usuwa wszystkie grupy fosforanowe, które próbowaliśmy wykryć za pomocą naszego przeciwciała przeciw fosfotyrozynie.
„Dopóki nie staną się świadomi, nigdy się nie zbuntują i dopóki się nie zbuntują, nie mogą stać się świadomi”. Dlaczego to jest paradoks?
Zobacz poniżej: Zacznijmy od mówienia o tym, czym jest paradoks - który jest stwierdzeniem lub serią stwierdzeń, które same w sobie są logiczne, ale prowadzą do niemożliwości lub absurdów. http://en.wikipedia.org/wiki/Paradox Jednym z moich ulubionych jest: Poniższe stwierdzenie jest prawdziwe. Powyższe stwierdzenie jest fałszywe. Jeśli zastosujemy się do logiki, pierwsze stwierdzenie mówi, że drugie stwierdzenie jest prawdziwe. Ale drugie stwierdzenie mówi, że pierwsze zdanie jest fałszywe ... co oznacza, że pierwsze stwierdzenie powinno naprawdę czytać, że drugie stwierdzenie jest prawdziwe
Być może nie mam wystarczającej ilości kawy ... czy jest błąd w aplikacji wykresu w stosunku do (na przykład) x ^ 3 / (x + 1)? Nie rozumiem, dlaczego w Q II powinien być taki paraboliczny wygląd.
Nie, narzędzie graficzne działa dobrze. Mam wrażenie, że jest to bardziej problem matematyczny niż rzeczywisty błąd. Spróbuj wydrukować tę funkcję na dowolnym innym kalkulatorze wykresów online, uzyskasz dokładnie tę samą krzywą. Na przykład, powiedzmy, że x = 3. To da ci y = 3 ^ 3 / (3 + 1) = 27/4 Ale dla y = 27/4 = x ^ 3 / (x + 1) otrzymasz również 4x ^ 3 - 27x - 27 = 0 Spowoduje to {(x_1 = 3), (x_ (2,3) = - 1,5):} Wierzchołek tej parabolicznej rzeczy leży w (-3/2, 27/4), więc chyba to ma sens.
Ile czteroliterowych słów jest możliwych przy użyciu pierwszych 5 liter alfabetu, jeśli pierwsza litera nie może być literą a sąsiednie litery nie mogą być podobne?
Pierwsze pięć liter to A, B, C, D, E Rozważ to pole. Każde 1,2,3,4 miejsca reprezentuje miejsce na list. Pierwsze miejsce 1 można wypełnić na 4 sposoby. (Z wyjątkiem A) Pierwsze miejsce 2 można wypełnić na 4 sposoby. Pierwsze miejsce 1 można wypełnić na 3 sposoby. Pierwsze miejsce 1 można wypełnić na dwa sposoby. Pierwsze miejsce 1 można wypełnić na 1 sposób. Całkowita liczba sposobów = 4 * 4 * 3 * 2 * 1 = 96 sposobów W związku z tym można wykonać 96 liter.